研究表明，骨髓间充质干细胞(Bone marrow mesenchymal stem cells, BMMSCs)具有高度自我更新和多向分化潜能，能向缺血或者炎症组织趋化，且可以分泌多种血管生长因子，促进缺血组织处血管新生，因此被广泛用作治疗缺血性疾病中的种子细胞和转基因载体细胞。基于此，我们在已成功构建高效低毒脂多糖胺纳米囊泡（lipopolysaccharide nanopolymersomes，LNPs）基因载体（LNPs在体外对MSCs的GFP基因转染效率大于95%）、有长期从大鼠骨髓中获取培养BMMSCs及对其进行基因转染的丰富经验、已有pVEGF质粒的基础上。设想以LNPs为载体，以VEGF和Ang质粒为靶基因，以BMMSCs为靶细胞，构建基因传递系统，将其应用在缺血性疾病的治疗中，通过体内外转染实验探索该体系在快速建立新的循环通路、有效改善人体器官组织供血不足中的可行性，达到最终为临床提供一种更安全高效的非病毒基因传递系统、更安全简便有效的缺血性疾病的治疗方法，为经双细胞因子基因修饰的BMMSCs在缺血性疾病中的应用提供理论和实践依据。
    主要研究开发内容：

    (1) 骨髓来源的MSCs 的制备;

    (2) 脂多糖胺纳米囊泡（LNPs）基因载体的制备;

    (3) 分别负载pVEGF、pAng 的LNPs 纳米囊泡的制备;

    (4) 表达VEGF、Ang 的MSCs 的制备及表征以LNPs 为载体，制备分别或同时转染pVEGF、pAng 的MSCs（记为MSC-V，MSC-A、MSC-VA），采用ELISA 方法定量测定蛋白的表达量，用血管相关细胞增殖实验验证表达蛋白的活性，研究两种质粒配比的改变对蛋白表达及细胞增殖的影响。

   (5) 斑马鱼、鼠体内诱导新生血管形成实验。1）通过斑马鱼实验验证MSC-V，MSC-A，MSC-VA 促血管生成效应，比较三者差别，及MSC-VA 中两种基因配比对血管生成的影响，筛选出最佳配方用于鼠动物实验。2）通过鼠下肢缺血模型，验证MSC-V，MSC-A，MSC-VA 促功能化血管生成效应。
   (6) 总结：评价上述联合了干细胞的双基因传递系统诱导新生功能化血管形成、治疗缺血性疾病的可行性。